MSC - EVs抑制NETs介导的内皮细胞粘附连接损伤改善脓毒症急性肺损伤
论文摘要: 目的：
本研究旨在探讨中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）加剧脓毒症肺损伤的机制，并提出MSC-EVs通过抑制NETs生成改善脓毒症急性肺损伤的潜在作用。
探究方法：
本研究采用盲肠结扎穿刺法（CLP）建立小鼠脓毒症急性肺损伤（SI-ALI）模型。为探讨间充质干细胞来源细胞外囊泡（MSC-EVs）的作用，于CLP后3 h尾静脉注射MSC-EVs。通过H&E染色，依据出血、炎性细胞浸润、肺泡水肿及隔厚度等指标进行肺损伤程度半定量评分。通过湿干重比评价肺水肿程度。通过伊文思蓝染色方法测定肺组织血管通透性。免疫荧光用于检测内皮连接蛋白变化，ELISA检测血清及细胞上清中髓过氧化物酶（MPO）水平，PicoGreen法测定双链DNA（dsDNA）浓度。
在体外，培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）并给予不同浓度或时间梯度的NETs刺激，以观察中性粒细胞对内皮细胞损伤。免疫荧光染色及qPCR测定mtDNA水平。透射电镜、免疫荧光检测MAMs的水平。通过MSC-EVs干预PMA诱导的中性粒细胞NETs生成，观察其调控作用。MSC-EVs由人脐带间充质干细胞培养上清经超速离心提取，采用透射电镜及纳米流式分析其形态与粒径分布，Western blot鉴定特征蛋白（Alix、CD9、CD63、Calnexin）。细胞增殖通过CCK-8法检测，ROS水平用DCFH-DA探针测定，MSC-EVs摄取通过PKH67荧光标记观察。蛋白表达采用Western blot检测，包括CitH3、MPO、cGAS-STING、VE-cadherin等。所有数据以均数±标准差 (mean±SD)表示，组间比较采用t检验或单因素方差分析（ANOVA），P < 0.05为差异显著。
结论：
脓毒症时中性粒细胞释放的NETs显著加重急性肺损伤，MSC-EVs可通过抑制中性粒细胞NETs生成改善脓毒症诱导的急性肺损伤。机制上，NETs通过诱导内皮细胞线粒体-内质网接触(MAMs)，引起内皮细胞线粒体损伤及功能障碍，促进内源性mtDNA释放，激活cGAS-STING信号诱导内皮细胞炎症、降低 VE-钙黏蛋白的表达，导致内皮细胞粘附连接损伤，加剧 SI-ALI 损伤。此外，MSC-EVs 通过 ROS/mTOR通路将 NET 生成向细胞凋亡转变，从而抑制 NET 的生成。本研究阐明了 NET 诱导的内皮损伤在 SI-ALI 中的致病作用，并阐明 MSC-EVs 在治疗SI-ALI中的作用及机制。